細胞系的建立過(guò)程

細胞建系的一般程序包括原代培養、第一次傳代、常規傳代、凍存與復蘇等過(guò)程。所涉及的原代培養、第一次傳代、常規傳代、凍存與復蘇等過(guò)程的具體方法與常規的原代培養等技術(shù)一樣。
①取材：材料主要來(lái)源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時(shí)避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養材料。取材后盡快培養，因故不能立即培養者，可凍存。其培養方法及凍存方法同正常組織。
②細胞的純化：在腫瘤組織中?；祀s有一些成纖維細胞，培養時(shí)能與瘤細胞同時(shí)生長(cháng)，并常壓過(guò)癌細胞，導致細胞生長(cháng)受阻甚至消失，應仔細排除。排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。
③提高細胞培養存活率和生長(cháng)率：根據實(shí)驗經(jīng)驗，細胞在體外不易培養，建立能傳代的細胞系更為困難。一般當組織或細胞被原代培養后，要經(jīng)過(guò)對新環(huán)境的適應才能生長(cháng)，因此不能局限于一般培養法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長(cháng)因子，根據細胞種類(lèi)不同選用不同的促細胞生長(cháng)因子，如胰島素、氫化可的松，雌激素等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養。