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原代細胞的培養問(wèn)題

更新時(shí)間:2022-04-20瀏覽:1001次

  原代細胞培養問(wèn)題:
 
  1、原代細胞與細胞系有什么區別?
 
  根據傳統定義,自組織第一次收獲和接種的細胞被稱(chēng)為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類(lèi)細胞直接從組織分離,生命周期有限,經(jīng)數次傳代后會(huì )逐漸停止生長(cháng)。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的最大生長(cháng)空間,以保持細胞群中基因型和表型的一致性。
 
  細胞系是不斷生長(cháng)、分化的細胞群,因其經(jīng)過(guò)遺傳改造,致使其具有無(wú)限增長(cháng)的潛能。體外生長(cháng)的細胞系用于醫療或科研。
 
  但實(shí)際上,經(jīng)過(guò)長(cháng)時(shí)間、連續的傳代培養后,細胞系隨著(zhù)代數的增加,細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
 
  需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì )有所不同。許多研究員不用細胞系這個(gè)詞表示細胞群,除非細胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
 
  2、倍增和代數有什么區別?
 
  倍增是培養物中細胞總數的翻倍,通常是指細胞指數或對數生長(cháng)期。代數是指細胞群從培養瓶中移出,傳代培養過(guò)程的次數,傳代培養的目的,是使細胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(cháng)。
 
  3、接收到的凍存細胞該如何處理?
 
  收到包裝箱后,立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快,以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃,這樣會(huì )對細胞造成不可挽回的傷害。
 
  4、凍存的細胞該如何開(kāi)始培養?
 
  (1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
 
  (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體*融化。
 
  (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無(wú)菌環(huán)境。
 
  (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
 
  (5) 打開(kāi)蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì )有少量溢出,這是正?,F象)。
 
  (6) 用多聚賴(lài)氨酸(或參照說(shuō)明書(shū))包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細胞。
 
  (7) 蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開(kāi)蓋子。
 
  (8) 將培養瓶放入培養箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
 
  (9) 放入培養箱后第6-16小時(shí)更換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
 
  5、細胞培養過(guò)程中,多久更換一次培養基?
 
  這取決于細胞生長(cháng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養基,許多細胞培養實(shí)驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
 
  注意:凍存細胞復蘇后,在6-16小時(shí)內更換培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。
 
  6、我能擴增培養和再次凍存原代正常人類(lèi)細胞嗎?
 
  這取決于細胞的類(lèi)型。一些細胞類(lèi)型像神經(jīng)細胞,神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長(cháng)緩慢的上皮細胞,不推薦擴增培養和再次凍存。其它的細胞類(lèi)型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等,可以擴增培養和再次凍存。
 
  然而,需要注意的是再次凍存的過(guò)程可能導致細胞生長(cháng)性能的改變。
 
  7、培養瓶中應該加入多少體積的培養基?
 
  我們推薦的用量為:T-25培養瓶5ml,T-75培養瓶15ml,T-150培養瓶30ml。

 

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