原代細胞的培養問(wèn)題

　　原代細胞培養問(wèn)題：
 

　　1、原代細胞與細胞系有什么區別？
 

　　根據傳統定義，自組織第一次收獲和接種的細胞被稱(chēng)為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類(lèi)細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數次傳代后會(huì )逐漸停止生長(cháng)。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的最大生長(cháng)空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。
 

　　細胞系是不斷生長(cháng)、分化的細胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(cháng)的潛能。體外生長(cháng)的細胞系用于醫療或科研。
 

　　但實(shí)際上，經(jīng)過(guò)長(cháng)時(shí)間、連續的傳代培養后，細胞系隨著(zhù)代數的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
 

　　需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì )有所不同。許多研究員不用細胞系這個(gè)詞表示細胞群，除非細胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
 

　　2、倍增和代數有什么區別？
 

　　倍增是培養物中細胞總數的翻倍，通常是指細胞指數或對數生長(cháng)期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過(guò)程的次數，傳代培養的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(cháng)。
 

　　3、接收到的凍存細胞該如何處理？
 

　　收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會(huì )對細胞造成不可挽回的傷害。
 

　　4、凍存的細胞該如何開(kāi)始培養？
 

　　(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。
 

　　(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內物體*融化。
 

　　(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉入無(wú)菌環(huán)境。
 

　　(4) 用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
 

　　(5) 打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負壓，開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì )有少量溢出，這是正?，F象)。
 

　　(6) 用多聚賴(lài)氨酸(或參照說(shuō)明書(shū))包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細胞。
 

　　(7) 蓋好培養瓶的蓋子，輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開(kāi)蓋子。
 

　　(8) 將培養瓶放入培養箱中(37℃，5%CO2，95%空氣)
 

　　(9) 放入培養箱后第6-16小時(shí)更換一次培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
 

　　5、細胞培養過(guò)程中，多久更換一次培養基？
 

　　這取決于細胞生長(cháng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養基，許多細胞培養實(shí)驗室通常在周一，周三，周五更換培養基。
 

　　注意：凍存細胞復蘇后，在6-16小時(shí)內更換培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。
 

　　6、我能擴增培養和再次凍存原代正常人類(lèi)細胞嗎？
 

　　這取決于細胞的類(lèi)型。一些細胞類(lèi)型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長(cháng)緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養和再次凍存。其它的細胞類(lèi)型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等，可以擴增培養和再次凍存。
 

　　然而，需要注意的是再次凍存的過(guò)程可能導致細胞生長(cháng)性能的改變。
 

　　7、培養瓶中應該加入多少體積的培養基？
 

　　我們推薦的用量為：T-25培養瓶5ml，T-75培養瓶15ml，T-150培養瓶30ml。