您的位置: 首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 人非小細胞肺癌細胞通過(guò)去泛素化和穩定KLF4抑制非小細胞肺癌

人非小細胞肺癌細胞通過(guò)去泛素化和穩定KLF4抑制非小細胞肺癌

更新時(shí)間:2022-08-12瀏覽:1145次

今天我們來(lái)看看一篇關(guān)于非小細胞肺癌的文獻,首先還是了解下背景。









肺癌是世界上普遍認為的死亡率最高的癌癥,沒(méi)有之一。肺癌中約有85%是非小細胞肺癌(NSCLC)。據報道,早期肺癌患者5年存活率為70%,晚期患者5年存活率不高于20%。在如此高死亡率的情況下,找到新的靶標分子對探索NSCLC治療有非凡意義。


之前的研究發(fā)現,泛素化涉及包括癌癥在內的多種疾病,被認為是潛在的治療靶點(diǎn)。OTUD1作為泛素酶的一員,是由481個(gè)氨基酸組成的,與影響諸多分子的各種生理功能有關(guān)。在乳腺癌、胰管腺癌、甲狀腺癌等均有相關(guān)研究證實(shí)其作用,還有研究發(fā)現OTUD1與改善NSCLC患者的預后有關(guān),然而目前尚不清楚是如何影響NSCLC的發(fā)展的。本文通過(guò)研究發(fā)現OTUD1在NSCLC中下調并抑制癌細胞,還發(fā)現OTUD1可以去泛素化并穩定KLF4,這種基因在不同癌癥中可以是致癌基因也可以是腫瘤抑制因子。在本文研究中,OUTD1通過(guò)穩定KLF4蛋白抑制NSCLC的發(fā)展,為NSCLC患者治療提供了一個(gè)很有希望的治療靶點(diǎn)。


先看看作者用到哪些組織和細胞。


  • NSCLC組織和癌旁組織:獲得患者同意并通過(guò)倫理審查后,取患者組織于液氮保存備用,一共6組;

  • HBE細胞:BEAS-2B細胞(人正常肺支氣管上皮細胞),SNL-203;

  • A549細胞:A549細胞(人非小細胞肺癌細胞),SNL-089;

  • PC9細胞:PC-9細胞(人肺腺癌細胞),SNL-152;

  • NCI-H1299細胞:NCI-H1299細胞(人非小細胞肺癌細胞),SNL-223;

  • Calu-3細胞:Calu-3細胞(人肺腺癌(胸水細胞)),SNL-214;



使用到的組織和細胞還是比較多,看的出來(lái)作者還是比較希望實(shí)驗結果更加準確的。

接下來(lái)就看看作者的實(shí)驗結果吧:

以下僅展示部分細胞實(shí)驗結果(實(shí)驗結果經(jīng)重新調整,非原文描述):

作者經(jīng)WB檢測OTUD1蛋白表達量發(fā)現,患者癌組織中OTUD1比正常組織低(圖片b,T為癌組織,N為癌旁正常組織),細胞系檢測也發(fā)現其在癌細胞中表達明顯低于正常細胞(圖片c)。


圖片


隨后,又通過(guò)轉染方式過(guò)表達OTUD1方式研究A549與PC9細胞的功能,發(fā)現經(jīng)過(guò)表達(圖片d)后,細胞增殖活力下降(圖片e),遷移率下降、侵襲能力降低(f)。


圖片


再通過(guò)shRNA沉默OTUD1基因(圖片g),發(fā)現沉默后的細胞增殖活力上升(圖片h),細胞遷移和侵襲能力升高(圖片i)。


圖片


通過(guò)GEPIA數據庫篩選,作者發(fā)現OTUD1與KLF4存在明顯正相關(guān),隨后使用PC-9過(guò)表達和敲除OTUD1的細胞研究發(fā)現,敲除OTUD1發(fā)現KLF4半衰期顯著(zhù)降低,但敲除和過(guò)表達的細胞中KLP4?。恚遥危帘磉_量卻沒(méi)有明顯差異,說(shuō)明OTUD1是通過(guò)降低KLF4的降解來(lái)穩定KLF4蛋白的。進(jìn)一步的研究發(fā)現OTUD1是通過(guò)去泛素化KLF4來(lái)穩定KLF4蛋白的,限于篇幅,就不再展示了,有興趣的童鞋可以查看原文。


原文:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1759-7714.14320。

圖片




本文用到的細胞系,都是常用的肺相關(guān)細胞,除CALU-3稍微難培養以外,其他細胞都是比較好培養的:

  1. BEAS-2B細胞(人正常肺支氣管上皮細胞,SNL-203是從一位非癌個(gè)體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞,用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆獲得的,細胞角蛋白及SV40抗原染色陽(yáng)性,是肺癌細胞相關(guān)實(shí)驗中常用的對照細胞;


  2. A549細胞(人非小細胞肺癌細胞,SNL-089,該細胞系是1972年由GiardDJ通過(guò)肺癌組織移植培養建系的,源自一位58歲的白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂,角蛋白陽(yáng)性,這個(gè)細胞大概是比較常用的肺癌細胞了;


  3. PC-9細胞(人肺腺癌細胞,SNL-152,該細胞是取自日本患者分化型肺腺癌的細胞,生長(cháng)時(shí)貼壁但仍會(huì )有部分圓形細胞,也是常用的肺腺癌細胞;


  4. NCI-H1299細胞(人非小細胞肺癌細胞,SNL-223,這株細胞來(lái)源于一個(gè)淋巴結轉移?;颊呓邮芰顺跗诜暖?。細胞均一性的部分缺失p53蛋白,并缺少p53蛋白表達。細胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,而不合成促胃液釋放肽(GRP)??;


  5. Calu-3細胞(人肺腺癌(胸水細胞),SNL-214,該細胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建立的;該患者曾使用過(guò)環(huán)磷酰胺、博來(lái)霉素、阿霉素進(jìn)行治療。該細胞接種至裸鼠可成瘤;可作轉染宿主。



END

圖片




 

聯(lián)系我們
  • QQ:1242926414
  • 郵箱:[email protected]
  • 傳真:86-027-87800889
  • 地址:武漢東湖新技術(shù)開(kāi)發(fā)區高新二路388號武漢光谷國際生物醫藥企業(yè)加速器1.2期C22棟二層

掃一掃,關(guān)注公眾號

©2024 武漢尚恩生物技術(shù)有限公司 版權所有    備案號:鄂ICP備2020018368號-2    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    Sitemap.xml    總訪(fǎng)問(wèn)量:122691    管理登陸