你了解細胞基礎培養基嗎?
更新時(shí)間:2022-10-25瀏覽:917次
細胞基礎培養基其工作基礎是用合適的激索、營(yíng)養物和促貼壁的物質(zhì)的組合置換培養基中的成分,專(zhuān)門(mén)用于神經(jīng)細胞培養,它的基礎培養基是1:1的DMEM與H12的混合液,添加了胰島素、轉鐵蛋白、黃體酗、腐胺和硒。胰島索和胰島索樣生長(cháng)因子對于大多數類(lèi)型細胞的存活和生長(cháng)有巫要作用,硒是谷胱甘肽產(chǎn)生的合作因子,可能有助于過(guò)氧化物和超氧化物的水解,有報道說(shuō)還能防止細胞的光照損傷。
隨后的其他配方如N1N3則含有較低濃度的轉鐵蛋白。未料到的是上述配方構成的培養基可以支持神經(jīng)母細胞瘤細胞系快速增殖,隨后又發(fā)展了能支持原代培養的各種神經(jīng)元生長(cháng)的培養基,這種培養基在許多實(shí)驗室里已取代了有血清培養。在某些培養方案中,細胞直接進(jìn)入無(wú)血清培養,這樣的培養基可以消除來(lái)自血清的不均一性。更為巫要的是,它們可用來(lái)檢測生長(cháng)因子以及其他促進(jìn)神經(jīng)元存活或生長(cháng)的因子,或者用來(lái)檢測那些可保護神經(jīng)元免遭環(huán)境毒物損傷的制劑。專(zhuān)用于神經(jīng)元的培養基在某些培養環(huán)境中還可以減低非神經(jīng)元細胞的增殖,故可使神經(jīng)元純化。
血清中含有的組分,例如血清蛋白,可作為代謝毒物清除劑使用并能聚集于培養基中。當缺乏這些成分時(shí),如神經(jīng)元在無(wú)血清培養基中生長(cháng)時(shí),特別容易為過(guò)氧化物及自由基傷害,這己被許多研究者注意到了。過(guò)氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培養基中過(guò)氧化物和超氧化物的累積,有報道講可以促進(jìn)低密度培養細胞的存活。有學(xué)者發(fā)現細胞存活可為氧分壓的下降而促進(jìn)。因而,無(wú)血清培養基的配方常含有抗氧化劑的試劑。例如,維牛索E和丙酮酸,可作為過(guò)氧化物清除劑使用。上述這些影響在高密度培養時(shí)變小,特別是神經(jīng)元與膠質(zhì)共培養時(shí),它們可以吸收和代謝神經(jīng)元毒性物質(zhì)如谷氨酸。
應該注意,盡管細胞基礎培養基是有化學(xué)限定性的,但在培養過(guò)程中它仍有變動(dòng),培養起始時(shí)可能有些物質(zhì)缺乏,而后細胞的產(chǎn)物可能積累,從而使培養基的成分改變。這其實(shí)是有另一方面的好處,即條件培養基(已培養過(guò)細胞的培養基)的形成,條件培養基常常用來(lái)增加神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞的發(fā)育。