細胞攻略 | THP-1(人單核細胞白血病細胞)細胞培養教程

細 胞 基 本 信 息

▲細胞正常生長(cháng)形態(tài)照片

細胞名稱(chēng)：THP-1(人單核細胞白血病細胞)

細胞別稱(chēng)：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1

細胞貨號:  SNL-044

生長(cháng)特性:  懸浮

培養條件:  1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1% P/S

培養環(huán)境:  空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

細胞簡(jiǎn)介：THP-1細胞從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立，細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞，細胞膜和胞漿內均沒(méi)有免疫球蛋白，表達C3R和FcR。THP-1細胞可受佛波酯、TPA誘導向單核系方向分化。THP-1細胞可以用于3D細胞培養、免疫系統紊亂、免疫學(xué)和毒理學(xué)研究，也是一種合適的轉染宿主。

THP-1細胞培養注意事項

THP-1細胞懸浮圓形生長(cháng)，偶有小聚團，屬于正?，F象，無(wú)需吹散；

 圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞，如果無(wú)法判斷，可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數確定細胞活率；

少量細胞附著(zhù)瓶底屬于正?，F象，可將懸浮細胞轉移至新瓶，丟棄貼壁的細胞；

THP-1喜歡偏酸環(huán)境，培養基呈橘色時(shí)可不用換液，補充適量新鮮培養基維持一天再進(jìn)行換液或傳代操作；

THP-1有密度依賴(lài)性，密度低時(shí)生長(cháng)較慢，培養密度維持在30萬(wàn)-100萬(wàn)細胞/mL之間為宜，超過(guò)80萬(wàn)細胞/mL即可傳代；

THP-1復蘇后恢復較慢，如無(wú)特殊情況，復蘇后48小時(shí)內不對細胞進(jìn)行操作；

THP-1生長(cháng)需要穩定的環(huán)境，不頻繁拿出培養箱，不頻繁離心；

培養時(shí)瓶子豎立放置（瓶蓋朝上），可增加細胞局部密度，促進(jìn)細胞增殖。

β-巰基乙醇可以消除活性氧自由基，維持細胞高密度生長(cháng)。若培養基中不添加β-巰基乙醇，長(cháng)期培養細胞可能會(huì )出現大量貼壁，嚴重聚團等情況。

THP-1 細 胞 換 液 方 法

離心換液法：

1.  準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2.  將所有細胞懸液轉移至離心管中；

3.  900-1000rpm，3min離心；

4.  棄上清，加5mL PBS輕輕重懸細胞進(jìn)行潤洗，再900-1000rpm，3min離心；

Tips：此處PBS潤洗是為了去除細胞碎片，平時(shí)培養若細胞碎片不多可以忽略此步驟，若碎片偏多，可以重復潤洗2次。

5. 培養瓶中加入適量新鮮培養基；

6. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養瓶中，混勻細胞，放入培養箱中繼續培養。

半換液法：

1.  準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2.  將培養瓶豎立靜置一段時(shí)間，待細胞沉底；（肉眼觀(guān)察細胞沉底情況）

3.  小心吸出一半的培養基，轉移到離心管；

4.  900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養基重懸后放回原瓶；

5.  原瓶補充一半的新鮮培養基。

Tips：半換液2-3次后需要進(jìn)行離心換液。

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THP-1 細 胞 傳 代 方 法

離心法：

1.  取少量細胞懸液進(jìn)行計數確定細胞密度，密度80萬(wàn)/mL以上傳代，并根據計數結果確定傳代比例；

2.  準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

3.  用移液器吸取培養瓶?jì)燃毎麘乙恨D移至離心管中；

4.  900-1000rpm，3min離心收集細胞；

5.  在培養瓶中加入適量新鮮培養基；（T25推薦10mL，T75推薦15mL）

6.  離心完成后，棄離心管內上清，然后加入適量新鮮培養基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Tips：懸浮細胞通常都偏脆弱，注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉速以及時(shí)間不要過(guò)高，避免細胞受機械損傷。

直接分瓶法：

1.  取少量細胞懸液進(jìn)行計數確定細胞密度，密度80w/mL以上傳代，并根據計數結果確定傳代比例；

2.  輕輕搖晃培養瓶，使細胞均勻分散；

3.  用移液器吸取培養瓶?jì)燃毎麘乙?，均分到若干個(gè)新培養瓶中，每瓶再補充適量的新鮮培養基，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Tips：用直接分瓶法傳代1-2次后需進(jìn)行離心傳代。

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THP-1 細 胞 凍 存 方 法

1.  取少量細胞懸液進(jìn)行計數確認細胞密度。

Tips：若凍存前培養基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養4h左右，待細胞活力穩定后再進(jìn)行凍存。

2.  準備所需的培養基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（試劑需提前預熱）

3.  根據收集到細胞量，配制相應量的凍存液，并準備相應數量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱(chēng)，代次，凍存時(shí)間等信息。推薦凍存液配方：90%FBS+10%DMSO；凍存密度200-300萬(wàn)細胞/mL/管。

Tips：凍存密度過(guò)低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。

4.  將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；

5.  離心完成后棄上清，加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細胞后及時(shí)分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。

6.  將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進(jìn)行降溫凍存。

7.  次日復蘇一管檢查凍存效果，確認沒(méi)問(wèn)題后及時(shí)將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時(shí)間不要超過(guò)3天。

THP-1 細 胞 復 蘇 方 法

1.  提前將水浴鍋預熱至37℃，培養基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉速；

2.  將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時(shí)間1min左右；

Tips：若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

3.  直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時(shí)在培養瓶中加入適量新鮮培養基；

4.  離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養基輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養瓶中；

5.  使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養箱中培養。

Tips：整個(gè)細胞復蘇過(guò)程在盡可能5-10min內完成。

THP-1 細 胞 收 貨 攻 略

1. 拆封包裝盒，確認細胞，說(shuō)明書(shū)等是否齊全，收貨細胞名與所購買(mǎi)細胞是否符合；

2. 觀(guān)察細胞培養瓶是否完好，有無(wú)漏液，培養瓶?jì)扰囵B基是否有肉眼可見(jiàn)的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現異常及時(shí)拍照聯(lián)系銷(xiāo)售人員；

3. 確認無(wú)異常后，將培養瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養箱平衡4h左右，讓?xiě)腋〖毎料屡囵B瓶底部；

4. 平衡過(guò)程中可以仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，知悉細胞所需培養體系，培養環(huán)境以及培養注意事項等；

5. 平衡完成后豎立取出細胞培養瓶，此時(shí)大部分細胞沉在培養瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養基在培養瓶?jì)?，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續用于培養細胞，以平穩過(guò)度到自己的培養基。將收集到的細胞接種至原培養瓶；

7. 輕輕混勻細胞，取100-200ul細胞懸液進(jìn)行計數，根據計數結果調整細胞培養密度。然后置于培養箱中培養。

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