--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱(chēng)： OCI-LY3(人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞)

細胞別稱(chēng)： OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3

細胞貨號： SNL-226

生長(cháng)特性： 懸浮

培養條件： 1640+20% FBS+1% P/S

培養環(huán)境： 空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%；37℃

細胞簡(jiǎn)介： OCI-LY3細胞于1983年從一名復發(fā)時(shí)患有B細胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL，彌漫性大B細胞淋巴瘤，DLBCL，4B期）的52歲男性骨髓樣本中建立，是一種激活型的B淋巴細胞。OCI-LY3細胞在文獻中描述為EBV陰性，缺乏典型的t（8；14）易位。OCI-LY3細胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈陰性。

細胞正常生長(cháng)形態(tài)照片

OCI-LY3細胞培養注意事項

l OCI-LY3細胞大部分聚集成葡萄串狀懸浮生長(cháng)，細胞團較大時(shí)需要吹打成小團，防止團塊中間的細胞因營(yíng)養不足而死亡，小團塊無(wú)需處理。除非實(shí)驗需要，不建議將細胞吹散成單個(gè)細胞。

l OCI-LY3細胞對血清要求高，應該使用優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養，血清比例為20%；

l 隨著(zhù)培養時(shí)間增加，會(huì )有部分細胞貼壁伸展的情況，傳代時(shí)可以輕輕吹打細胞貼壁面，吹下的細胞可以正常傳代，未吹下的細胞無(wú)需收集。

l 該細胞培養過(guò)程存在密度依賴(lài)的情況，細胞密度建議維持在1E5-5E5/ml之間，密度過(guò)低或者過(guò)高可能會(huì )影響細胞狀態(tài)；

OCI-LY3細胞換液方法

l 半換液法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 將培養瓶靜置5-10min，待細胞沉底；（肉眼觀(guān)察細胞沉底情況）

3. 吸頭緊貼液體表面，小心吸出一半的培養基，轉移到離心管；

4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養基重懸后放回原瓶；

5. 原瓶補充一半的新鮮培養基。

l 離心換液法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 將所有細胞懸液轉移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心；

4. 培養瓶中加入適量新鮮培養基；

5. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養瓶中，混勻細胞，放入培養箱中繼續培養。

OCI-LY3細胞傳代方法

l 離心法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 用移液器吸取培養瓶?jì)燃毎麘乙?/span>轉移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心收集細胞；

4. 在培養瓶中加入適量新鮮培養基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

5. 離心完成后，棄離心管內上清，然后加入適量新鮮培養基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至若干個(gè)新的培養瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

l 直接分瓶法：

1. 輕輕將細胞吹散成小團并混勻。

2. 用移液器吸取培養瓶?jì)燃毎麘乙?，均分到若干個(gè)新培養瓶中，每瓶再補充適量的新鮮培養基，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Tips：

l 注意控制吹打力度盡可能輕柔，吹打次數不要過(guò)多，避免細胞受機械損傷。

l 傳代比例推薦1：2

OCI-LY3細胞凍存方法

1. 準備所需的培養基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（試劑需提前預熱）

Tips：若凍存前培養基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養4h左右，待細胞活力穩定后再進(jìn)行凍存。

2. 根據收集到細胞量，配制相應量的凍存液，并準備相應數量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱(chēng)，代次，凍存時(shí)間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO或92%完*培養基+8%DMSO；凍存密度300萬(wàn)細胞/mL/管。

Tips：凍存密度過(guò)低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。

3. 將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；

4. 離心完成后棄上清，加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細胞后及時(shí)分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。

5. 將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進(jìn)行降溫凍存。

6. 次日（16h-24h后）復蘇一管檢查凍存效果，確認沒(méi)問(wèn)題后及時(shí)將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時(shí)間不要超過(guò)3天。

OCI-LY3細胞復蘇方法

1. 提前將水浴鍋預熱至37℃，培養基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉速；

2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時(shí)間不超過(guò)2min；

Tips：

l 若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

l 水浴時(shí)使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。

3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時(shí)在培養瓶中加入適量新鮮培養基；

4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養基（建議血清濃度提高至20%）輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養瓶中；

5. 使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養箱中培養。

Tips：整個(gè)細胞復蘇過(guò)程在盡可能5-10min內完成。

OCI-LY3細胞收貨攻略

1. 拆封包裝盒，確認細胞，說(shuō)明書(shū)等是否齊全，收貨細胞名與所購買(mǎi)細胞是否符合；

2. 觀(guān)察細胞培養瓶是否完好，有無(wú)漏液，培養瓶?jì)扰囵B基是否有肉眼可見(jiàn)的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現異常及時(shí)拍照聯(lián)系銷(xiāo)售人員；

3. 確認無(wú)異常后，將培養瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養箱平衡4h左右，讓?xiě)腋〖毎料屡囵B瓶底部；

4. 平衡過(guò)程中可以仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，知悉細胞所需培養體系，培養環(huán)境以及培養注意事項等；

5. 平衡完成后豎立取出細胞培養瓶，此時(shí)大部分細胞沉在培養瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養基在培養瓶?jì)?，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續用于培養細胞，以平穩過(guò)度到自己的培養基。將收集到的細胞接種至原培養瓶；

7. 觀(guān)察細胞，根據細胞狀態(tài)，以及團塊數量、大小決定傳代或繼續培養。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

培養過(guò)程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個(gè)屬于細胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細胞都會(huì )有這種現象，只是不同細胞顆粒多少有區別，細胞培養體系不適應、營(yíng)養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加，建議使用合適的培養條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可通過(guò)800rpm，3min低速離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細胞生長(cháng)，不建議頻繁離心。

產(chǎn)品推薦：

【SNL-226】OCI-LY3(人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞)(STR鑒定正確)

【SNLM-226】OCI-LY3細胞專(zhuān)用完*培養基