小鼠原代細胞的改良培養

　　小鼠原代細胞培養技術(shù)日漸成熟，但在同樣實(shí)驗條件下不易獲得，而小鼠基因組與人類(lèi)基因組有更多相似之處，具有更高的研究?jì)r(jià)值。改進(jìn)小鼠乳鼠原代心肌細胞的培養方法，得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結構和功能的心肌細胞。

　　方法：將小鼠心肌組織利用酶消方法分離為單個(gè)的心肌細胞，實(shí)驗步驟中將經(jīng)典的胰酶、膠原蛋白酶混合酶消法分解開(kāi)，先用胰酶消化心肌組織，使心肌組織變得松散，再用膠原蛋白酶，作用于細胞間質(zhì)的膠原纖維，使心肌組織分離為單個(gè)的小鼠原代細胞。調整胰酶和IⅡ型膠原蛋白酶的濃度和作用時(shí)間，嚴格控制試劑pH值和各步驟的溫度。

　　結果與結論：心肌細胞在接種24h后開(kāi)始貼壁，48h后可觀(guān)察到部分心肌細胞出現自主搏動(dòng)，72h后彼此形成交聯(lián)，96h后可觀(guān)察到心肌細胞形成細胞簇，并出現一致性搏動(dòng)。心肌細胞的存活率和純度均達95%以上。結果證實(shí)，實(shí)驗采用改良方法成功培養出小鼠原代細胞，并且保留心肌細胞的結構和功能，純度和成活率高，是可行的培養方法。

　　小鼠原代細胞之所以大力培養原因是小鼠基因組與人類(lèi)基因組有更多相似之處，具有更高的研究?jì)r(jià)值。國內外學(xué)者對通過(guò)培養原代乳鼠心肌細胞，從而進(jìn)一步研究心肌細胞對缺氧、缺血等相關(guān)心臟疾病的發(fā)病機制進(jìn)行了大量工作。大鼠心肌細胞原代培養技術(shù)日漸成熟，但是小鼠心肌細胞在同樣實(shí)驗條件下不易獲得。采用混合酶消化心肌細胞，而是先用胰酶消化，后用膠原蛋白酶消化的實(shí)驗方法獲得心肌細胞，此種操作方法可得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結構和功能的心肌細胞。