293細胞購入時(shí)建議先大量?jì)龃?/h1>

更新時(shí)間：2021-08-24瀏覽：1036次

　　293細胞是轉染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系，293T細胞由293細胞派生，同時(shí)表達SV40大T抗原，含有SV40復制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區的質(zhì)?？梢詮椭?。用Ca3(PO4）2轉染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時(shí)轉染293T細胞是過(guò)表達蛋白并獲得細胞內及細胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。

　　通常轉染效率與代數相關(guān)，建議選擇代數低的細胞進(jìn)行轉染。如果質(zhì)粒中含SV40復制起始點(diǎn)，可以選擇293T或293T/17。這些細胞貼壁不牢，特別是溫度低于30攝氏度時(shí)很容易卷曲脫落，建議使用Cellbind細胞培養瓶培養。

　　293細胞培養特性：

　　1、293細胞明顯適應酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時(shí),可順利貼壁生長(cháng),換液時(shí)動(dòng)作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。

　　2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長(cháng)良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀(guān)察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復吹打至細胞全成單個(gè)懸浮細胞即可。12小時(shí)-24小時(shí)90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時(shí)機為達80-90%匯合，傳代比例為1：3。

　　3、293細胞在低代時(shí)容易貼壁，生長(cháng)良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS沖洗時(shí)即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液，購入時(shí)先大量?jì)龃妗?/div>

　　4、復蘇：293細胞的另一生長(cháng)特性是貼壁所需時(shí)間長(cháng)且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時(shí),都有不同程度的腫脹,若以50ml培養瓶待細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底的70%～80%時(shí)消化凍存,復蘇時(shí)將其全部接種至2個(gè)50ml瓶中時(shí)較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢，復蘇接種后24小時(shí)內,應盡量減少觀(guān)察細胞次數或不作觀(guān)察,以免因晃動(dòng)而影響細胞貼壁。復蘇后48小時(shí)左右觀(guān)察貼壁情況并進(jìn)行更換培養基比較合適,如果用一次性塑料培養瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養基預熱。

 

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