raw264.7細胞培養經(jīng)驗分享

　　raw264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴(lài)性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無(wú)作用。

　　raw264.7細胞培養經(jīng)驗：

　　1.基本情況：小鼠來(lái)源白血病毒誘導腫瘤細胞，屬于巨噬細胞，貼壁生長(cháng)。下圖是ATCC來(lái)源。主流觀(guān)點(diǎn)是以橢圓圓形細胞為主，激活分化后才有觸角。

　　形態(tài)以類(lèi)圓形和不規則為主，一般1--2個(gè)核，極少數有3個(gè)核，胞漿伸展時(shí)胞體較大。鏡下細胞為小珍珠似的圓形橢圓形。

　　2.培養情況

　　培養條件：10%FBS+高糖DMEN，進(jìn)口gibco血清更好

　　傳代：細胞增殖較快，70%即可傳代，細胞有觸角也提示需要傳代，1：3----1:6傳代，推薦使用皿。傳代時(shí)切記不要使用胰酶，正常情況下此細胞貼壁不牢，直接吹打即可，胰酶消化會(huì )使細胞伸出觸角改變形態(tài)。我是直接用培養基吹打，也可以用PBS，感覺(jué)無(wú)差異。這個(gè)細胞增殖較快，培養基消耗快容易變黃，要勤換液。

　　凍存和復蘇：和普通細胞無(wú)異。

　　raw264.7細胞作為巨噬細胞有很強的吞噬能力，吞噬抗原后伸出長(cháng)角，就是大家常見(jiàn)的偽足。同時(shí)貼壁黏附能力增強，傳代時(shí)難以消化下來(lái)。該細胞貼壁時(shí)間短，成片生長(cháng)，似小菌落般小片生長(cháng)，連成一片并會(huì )疊層。傳代密度不易過(guò)高或者過(guò)低，過(guò)低會(huì )導致細胞生長(cháng)緩慢甚至不生長(cháng)，過(guò)高，細胞會(huì )長(cháng)出偽足。

　　3.關(guān)于RAW264.7分化，正常細胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細胞，分化后伸出偽足，貼壁能力增強。

　　避免方法：

　　1，血清建議采用進(jìn)口的真血清，

　　2，密度不要太高或者太低，傳代時(shí)切不可拖延時(shí)間，

　　3，傳代時(shí)切不可胰酶消化，直接吹打就能下來(lái)，

　　4，不要污染，包括其他細胞株的污染。